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關(guān)于UHPLC色譜柱填充和性能的評(píng)價(jià)指標(biāo)

更新時(shí)間:2017-11-26瀏覽:2774次
UHPLC色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下,填料粒度>20µm時(shí),干法填充制備柱較為合適;顆粒<20µm時(shí),濕法填充較為理想。填充方法一般有4種:①高壓勻漿法,多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;②徑向加壓法,Waters;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;④干法。柱填充的技術(shù)性很強(qiáng),大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用已填充好的商品柱。
必須指出,液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié),但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。
無(wú)論是自己裝填的還是購(gòu)買的色譜柱,使用前都要對(duì)其性能進(jìn)行考察,使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下(樣品、流動(dòng)相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對(duì)稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。一般說(shuō)來(lái)容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。進(jìn)行柱效比較時(shí),還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。
一份合格的UHPLC色譜柱評(píng)價(jià)報(bào)告應(yīng)給出柱的基本參數(shù),如柱長(zhǎng)、內(nèi)徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對(duì)稱度和柱壓降等。
UHPLC色譜柱的維護(hù):
1、使用保護(hù)柱
2、大多數(shù)柱的PH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡可能在此范圍內(nèi)使用
3、避免流動(dòng)相組成及極性有劇烈變化
4、流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相,要在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈
6、壓力升高時(shí)更換保護(hù)柱
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